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非苛養非腸道革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒（比色法）說明書
【產品名稱】
通用名稱：非苛養非腸道革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒（比色法）
英文名稱：API 20 NE
【包裝規格】
25 測試/盒
【預期用途】
該產品用于非苛養、非腸道革蘭陰性桿菌的鑒定。
該產品用于鑒定非苛養、非腸道革蘭陰性桿菌（如假單胞菌屬、不動桿菌屬、黃桿菌屬、莫拉菌屬、弧菌屬
和氣單胞菌屬等）的標準鑒定系統，包括 8 個常規試驗、12 個同化試驗和 1 個數據庫。
【檢驗原理】
API 20 NE 試劑條由裝有脫水底物的 20 個微型管構成。常規試驗接種重溶培養基的鹽水細菌懸液。在
培養過程中，代謝產生顏色變化，此變化可為自發或通過加入試劑顯示。同化試驗接種低培養基，如果它
們能夠使用相應的底物，則細菌生長。依照讀數表讀取反應，通過參考分析曲線指標或使用鑒別軟件得到鑒
別。
【儲存條件及有效期】
2~8℃儲存，有效期為 12 個月。
【適用儀器】
-
麥氏標準比濁管 (Ref. 70 900) No. 0.5
-
API 20 NE 分析鑒定系統 (Ref.20 090) 或 apiweb™鑒定軟件 (Ref.40 011) (咨詢生物梅里埃)
【樣本要求】
API 20 NE 不直接用于臨床或其他標本。
按照標準微生物學技術，必須首先在適合的培養基（如胰蛋白酶解酪蛋白）上分離要鑒定的微生物。
【檢驗方法】
氧化酶試驗
必須按照生產商的使用說明，進行氧化酶試驗。應當在結果單上記錄結果，因為它是最后圖譜的一個有
機部分（第 21 個鑒定試驗）。
菌落
API 20 NE 只應用于不屬于腸桿菌科的非苛養革蘭陰性桿菌。
注 1：有些非腸道的革蘭陰性桿菌亦為氧化酶陰性（嗜麥芽黃單胞菌、不動桿菌…）。這些微生物也可以
用 API 20 NE 鑒定，但必須根據其它細菌學或臨床標準加以選擇。
注 2：對營養要求多或需要適當處理注意事項的苛養微生物（如布魯氏菌和弗朗西絲氏菌），未包含在 API
20 NE 的數據庫內。必須采用其他方法排除或證實它們的存在。
試條的準備
準備一個培養盒、盤和蓋子，向盤的底部倒入約 5mL 蒸餾水或去離子水【或任何不含添加劑或可能釋放
氣體（如氯氣、二氧化碳等）的化學物的水】，創造一種濕氣。在盤的邊緣部分記錄標本編號。（不要在蓋上
記錄編號，因為在操作期間它可能錯位。）從各個包裝中取出試劑條。將試劑條放入培養盒中。
接種物的準備
? 按照本產品說明書“警告和注意事項"段落所示，打開一安瓿 API NaCI 0.85 %培養基（2 mL），或使
用含 2 mL 不含添加劑的 0.85 %生理鹽溶液。
? 使用吸管或滴管，通過抽吸或通過連續接觸，從瓊脂糖培養基上挑取 1 - 4 個形態相同的克隆。建議
使用早期培養物（18 - 24 小時）。
? 配制混懸液至濁度等于 0.5 McFarland。此混懸液在配制后必須立即使用。
注：調整接種物密度至 0.5 McFarland 非常重要；否則 API 20 NE 試劑條試驗可能不能正確發揮功能。
特別是，較弱的接種物可能導致假陰性結果。在操作試劑條的過程中，不要接觸反應杯，接種后不要將試劑
條長時間暴露空氣。
試條的接種
? 用同一根吸管將鹽水混懸液加到試驗管（不是反應杯），接種試驗 NO3到 PNPG。將試劑條稍前傾，將吸
管或滴管的頂部靠在杯的側面，以避免管的底部形成氣泡。非苛養非腸道革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒（比色法） 版本號 07615K -CN –2009/11
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?
按照“警告和注意事項"中所示，打開 1 個 API AUX 培養基安瓿，向安瓿加入約 200 L 剩余的鹽混懸液。
用吸管混勻，避免形成氣泡。
?
用混懸液注滿由 GLU 至 PAC 試驗管和杯。當心液面必是平的或稍凸，不能呈凹或新月形。杯子裝得不
滿或過滿可能給出不正確的結果。
?
向 3 個下劃線試驗（GLU、ADH 和 URE）的杯子加礦物油，直至形成凸出的新月形。
?
蓋上培養盒，在 29°C ± 2°C 培養 24 小時（± 2 小時）。
【陽性判斷值】
對于不同生化反應預期結果的范圍，查閱本說明書末尾的鑒別表。
【檢驗結果的解釋】
讀取試劑條
?
孵育期后，通過參閱判讀表，判讀試劑條。
?
在結果單上記錄所有自發反應（GLU、ADH、URE、ESC、 GEL 和 PNPG）。
?
為保護同化反應免受空氣播散的污染，應當進行兩個試驗 NO3 和 TRP 的判讀。要做這一點，在 NO3 和
TRP 試驗判讀期間，用培養盒蓋子遮蓋同化反應。
?
NO3 試驗：
-
各加一滴 NIT1 和 NIT2 試劑至 NO3 杯。
-
5 分鐘后，紅色表示陽性反應，記錄在報告單上。
-
由于氮氣的產生（表現為存在小氣泡）有可能引起陰性反應：加 2~3 mg Zn 試劑到 NO3杯中。
-
5 分鐘后，保持無色的杯子表明陽性反應，記錄在報告單上。如果杯子變為粉紅色，反應為陰性，因為管
中存在硝酸鹽，被鋅還原為亞硝酸鹽。
用于細菌鑒定的反應是硝酸鹽還原。當上述二個反應（產生 NO2 或 N2）中的任何一個為陽性時，硝酸鹽
還原反應為陽性。
但是，N2的產生則可單獨用作補充試驗（參閱分析圖譜索引）。
?
檢測：
加 1 滴 JAMES 試劑。立即發生反應：全杯出現粉紅色表明陽性結果，記錄在結果單上。
?
同化試驗：觀察細菌生長。不透明杯子表明陽性反應。
偶爾，1 個杯子顯示為弱生長。在這種情況，通過與試劑條上的其他試驗強度比較，結果應當記錄為 或
±。
注意:
一旦進行了上述判讀，如“解釋"段落中所示，鑒定是可能的。在下列情況，必須重新孵育：
-
無區別
-
無法接受或可疑的圖譜；
-
如果對獲得的圖譜標注了以下備注：
在 48 小時孵育前鑒定是無效的
使用習慣或滴管，通過抽吸吸走 NIT 1、NIT 2 和 JAMES 試劑，立即用礦物油掩蔽試驗 NO3 和 TRP，以便形
成凸的新月形。在 29°C ± 2°C 重新孵育 24 小時，除了只應在 24 小時判讀的前 3 個試驗（NO3、TRP 和 GLU），
其余試驗再讀一次結果。
說明：
采用數字譜獲得鑒定。
?
測定使用率：
在結果表上，將結果分成 3 組，每組標記為編號 1、2 或 4。在每組內加陽性反應相應的數字，得到一個
7 位數；氧化酶反應構成第 21 個反應，如果為陽性則數值為 4。
?
鑒定：
這采用數據庫（V7.0）進行
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棒狀桿菌鑒定用編碼冊
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查找圖譜中的數字譜。
梅里埃API20NE非發酵G-桿菌鑒定試劑盒
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